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      轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1(BT63)基因核酸檢測試劑盒反應(yīng)五要素

      日期:2021-10-20瀏覽:1823次

      轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1(BT63)基因核酸檢測試劑盒反應(yīng)五要素:

      參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

      引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

      ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

      ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

      ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

      ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

      ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

      ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

      ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

      引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

      帕金森病相關(guān)蛋白ATP13A2抗體

      肌側(cè)索硬化蛋白2抗體

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      肺α/β水解酶蛋白3抗體

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      三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A亞基5抗體

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      ?;o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體

      α/β水解酶4抗體

      ADCK2蛋白抗體

      乙醛脫氫酶16家庭A1抗體

      粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體

      乙醇脫氫酶1抗體

      δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體

      肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體

      α2巨球蛋白(α-2M)抗體

      ACCSL蛋白抗體

      甲胎蛋白抗體

      β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體

      星形肌動蛋白抗體

      系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體

      磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體

      磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體

      接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體


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