淺看多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法及特點(diǎn)

　　多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。

　　多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法：

　　一、稀釋PCR陽性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

　　1、注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA段作為陽性對(duì)照。

　　2、標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

　　3、用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

　　4、在7號(hào)管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

　　5、換槍頭，在6號(hào)管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

　　6、換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

　　7、重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

　　多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)具有下列特點(diǎn)：

　　1、根據(jù)指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

　　2、靈敏度比常規(guī)PCR高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

　　3、即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。

　　4、一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。

　　5、本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。

　　6、本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。