高遷移率族蛋白1免費代測試劑盒實驗原理

高遷移率族蛋白1免費代測試劑盒說明書

檢測范圍：12.5pg/mL~400pg/mL

保存條件：2-8℃低溫保存

保質期：6個月，所有試劑盒均提供批次。

試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。

選型：

產品規格：96T/48T

96T指可以做94個標本-2個標準對照-84個樣本

48T指可以做47個標本-1個標準對照-42個樣本主要成分：酶標板,試劑,標準品等。

試劑盒種屬：馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本..

試劑盒組成：

120 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7終止液6ml×1 瓶

2酶標試劑6ml×1 瓶8標準品（270ng/L）0.5ml×1 瓶

3酶標包被板12 孔×8 條9標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4樣品稀釋液6ml×1 瓶10說明書1 份

5顯色劑 A 液6ml×1 瓶11封板膜2 張

6顯色劑 B 液6ml×1/瓶12密封袋1 個

樣本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2400 ng/L5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

1200ng/L4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

600ng/L 3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

300ng/L2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150ng/L1 號標準品150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

使用方法：

測定法的靈敏度來自作為報告的酶。，酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導大量的催化反應，產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

 12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

 6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

 3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

 1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 

實驗注意事項：

1、手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過程數次。

2、自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

3、只有全部使用KA&M-BIO配套試劑才能保證檢測效果，因為所有試劑都是有關聯的，不能混用其他商的產品。只有嚴格遵守KA&M-BIO試劑盒的說明操作才會得到的檢測結果。

4、在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。

5、濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 

6、剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。

7、所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

8、有效期：6個月。